乙肝新型反义寡核酸和三种优化后ASOs正在临床前 _健康小知识

HBV-反义寡核苷酸（ASO）当前全球只有两家在研制中，分别是葛兰素史克和临床阶段生物制药公司（AligosTherapeutics）。虽然，今年三月末Aligos已宣布终止乙肝病毒反义寡核酸ALG-020572（1期多次报告ALT突然升高，提示肝毒性），该公司继续在动物实验中，探索HBVASOs分子。

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乙肝新型反义寡核酸，通过AAV-HBV模型，验证三种结构新颖ASOs
在2022年欧肝会上（EASL2022），研究人员发表了一项题为：结合新型ASO化学物质后，显著提高了AAV-HBV小鼠模型中HBVASOs的效力和持久性。应用专有化学方法开发了同类最佳的HBVASOs ，即ALG-020572和ALG-020576 ，它们都具有独特的N-乙酰半乳糖胺4(GalNac4)偶联物。
这些ASOs ，分别针对小HBsAg和HBx蛋白的开放阅读框。这两种ASOs均含有下一代螺环丙基桥接核酸(scpBNA)和核碱基修饰单体，可降低肝毒性，同时在AAV-HBV小鼠模型中保持疗效。
在这项研究中，研究人员进一步探索了ALG-020572和ALG-020576序列中的其他BNAs ，例如胍桥核酸(GuNA)和其他专有的BNAs ，并进一步证明了它们可以在体外和体内改善并提高活性。实验方法如下：
研究人员在MerMade12与MerMade48合成器上合成了具有LNA和第三代BNA化学成分的ASOs 。采用HBsAg释放法，在HepG2.2.15细胞或HBV感染原代人肝细胞（PHH）中进行体外筛选ASOs 。使用AAV-HBV小鼠模型，通过分析小鼠的血浆HBsAg和ALT以测试GalNAc-ASOs的疗效和对肝脏的毒性。

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结果表明，发现阶段的ALG-021682和ALG-021639是和ALG-020572定位相同位点的GalNAc4偶联ASOs 。 ALG-021682包含GuNA ，而ALG-021639包含一个新型第三代BNA 。在HepG2.2.15实验中，未偶联的ALG-021682的EC50比未偶联的ALG-020572低5倍。
在HBV感染PHH中，未缀合的ALG-021639比未缀合的ALG-020572效力高5倍。在AAV-HBV小鼠模型中，在单次皮下给药5mg/kgALG-021682和ALG-021639时，实现的乙肝表面抗原最低值要比ALG-020572类似物还低2倍。没有一个ASO ，显示ALT升高。
最后，发现阶段的ALG-021618是ALG-020576衍生的一种结构新颖ASO 。由于无法被HepG2.2.15细胞代谢处理，它在体外是无活性的。然而，在第0天、第3天和第7天重复给药3X10mg/kg的AAV-HBV小鼠模型中， ALG-021618实现的HBsAg最低值为-1.8log10IU/mlvs.ALG-020576-1.2log10IU/ml 。第60天，以ALG-020576给药的动物的HBsAg恢复到基线水平，但以ALG-021618给药的动物，仍将HBsAg抑制1log10IU/ml 。
综上所述，研究人员给出结论是：GuNA和其他新型BNAs ，改善了先导ASOALG-020572的体外和体内活性。经过新修饰后的ALG-020576 ，显著提高了对HBsAg敲低的体内深度和持久性。结合这些化学物质的进一步研究正在进行中。

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小番健康结语：随着GSK836第2期中期积极数据公布，我们都想更多地了解反义寡核酸（ASO）。 Aligos是全球另一家正在深入研究这一领域的制药公司，本研究想要介绍的进展其实很简单，即虽然HBV-ASOs-ALG-020572因对肝脏毒性在1期终止了，但在572的基础上，继续在动物实验中探索更多新型ASOs分子，比如本研究中的ALG-021682、ALG-021639和ALG-021618；
【乙肝新型反义寡核酸和三种优化后ASOs正在临床前】它们在AAV-HBV小鼠模型实验中显示，在抗病毒效力方向，特别是对乙肝表面抗原调降作用方面明显高于已经终止的ALG-020572 。同时，以上三种早期阶段的反义寡核苷酸，也没有一种导致转氨酶升高，即未见肝毒性。而ALG-021682与ALG-021639是基于ALG-020572基础上研发的， ALG-021618是基于ALG-020576基础上开发的反义寡核酸。