磁珠法提取动物组织RNA 如何判断提取质量？ _健康小知识

核酸提取传统方法传统的提取方法主要有酚/氯仿抽提法和硅胶柱法，这些传统提取方法可从不同组织样本中分离出DNA和RNA 。但这些技术中包含沉淀和离心等操作步骤，其所需的生物样本量较大，提取步骤较为繁杂、费时费力，得率也不高，难以实现自动化操作。
另外，大部分的传统方法中还需要用到有毒化学试剂，对操作人员的健康具有潜在危害，因此，伴随着分子生物学以及材料学的发展，采用磁珠的方法从液相系统中分离纯化核酸的新方法已经崛起。
一、磁珠法提取
（一）磁珠法提取原理：

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（二）传统核酸提取法和磁珠法比较：

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二、如何评估磁珠法提取RNA的效果？
这里给出两个评价尺度：RNA纯度和RNA完整性。
（一）RNA纯度判断
该指标通常用吸光度比值A260/A280和A260/A230来衡量。其中， A260nm是核酸最高吸收峰的吸收波长， A280nm是蛋白和酚类物质最高吸收峰的吸收波长， A230nm是碳水化合物最高吸收峰的吸收波长。
纯DNA的A260/A280比值为1.8 ，纯RNA为2.0 。如果比值低，表示受到蛋白（芳香族）或酚类物质的污染，需要纯化样品。当A260/A280<1.8时，溶液中蛋白或者其他有机物的污染比较明显；当A260/A280>2.2时，说明RNA已经水解成单核酸了。
纯DNA和RNA的A260/A230比值为2.5 。若A260/A230<2.0 ，表明样品被碳水化合物（糖类）、盐类或有机溶剂污染，需要纯化样品。
所以当1.8<A260/A280<2.2 ， A260/A230比值为2.5时， RNA纯度高。
（二）RNA完整性判断
分离完整的RNA在基因表达分析所用的众多技术中是必不可少的。 Northern分析， cDNA文库构建以及用于微阵列芯片分析的cDNA标记实验（尤其在使用oligo(dT)作为引物时）均要求RNA具有高度的完整性。
完整的总RNA在进行变性凝胶电泳时会产生清晰的28S和18SrRNA条带（真核样品）。 28SrRNA条带的强度应当大致为18SrRNA条带的两倍，这种2:1的比率（28S：18S）是判断RNA完整性的一个很好的指标，证明所提取的RNA未降解，完整性好，可用于后续试验。
部分降解的RNA样品电泳条带会弥散，没有清晰的rRNA条带，或者不会出现前面提到的高质量RNA才具有的2:1比率（28S:18S）。完全降解的RNA会表现为在极低分子量处的弥散状。电泳中加入RNA分子量标志物可以帮助确定条带或弥散对应大小，也可以帮助判断电泳是否正确进行。
三、凡知组织RNA提取试剂盒
（一）产品特性

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※RNA纯度高(OD260/2801.8-2.0)；
※高收率，无降解；
※无高分子量DNA污染(DNaseI处理)；
※适用多种样本类型；
※手工操作时间短；
（二）结果展示
1、紫外分光光度计浓度测定

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2、琼脂糖凝胶电泳图
（三）应用范围
纯化RNA适用于RT-PCR、RNA-Seq、芯片分析、分子克隆。返回搜狐，查看更多
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