学术前沿：AAV-CRISPR基因编辑疗法，让一次性注射治疗艾滋病成为可能 _健康小知识

艾滋病（AIDS），即获得性免疫缺陷综合征，是一种由人类免疫缺陷病毒（HIV）感染引起的危害性极大的传染病。 HIV病毒把人体免疫系统中最重要的CD4+T细胞作为主要攻击目标，大量破坏该细胞，经过数年、甚至长达10年或更长的潜伏期后发展成艾滋病病人，使人体丧失免疫功能，因抵抗力极度下降会出现多种感染，后期常常发生恶性肿瘤，以至全身衰竭而死亡。
在过去的几十年里，何大一等人提出的“鸡尾酒疗法”等联合治疗方案使得艾滋病成为了一种相对可控的慢性疾病， HIV感染患者的存活时间和生活质量也得到了极大的改善。然而，这些疗法只能抑制患者体内的HIV病毒，而不能彻底清除，因此也就无法治愈。据联合国艾滋病规划署数据，目前全球范围内现存HIV携带者和艾滋病患者人数高达3800万人，且数量仍在快速增长中。
近日，以色列特拉维夫大学的研究人员在NatureBiotechnology期刊上发表了题为：InvivoengineeredBcellssecretehightitersofbroadlyneutralizinganti-HIVantibodiesinmice的研究论文。
该研究使用两种腺相关病毒载体（AAV）同时递送CRISPR-Cas9基因编辑系统和靶向免疫球蛋白基因的修复模板，直接编辑小鼠内源B细胞的免疫球蛋白基因位点，有效地在体内修饰B细胞，使之能产生针对HIV病毒的中和抗体，让一次性注射治疗艾滋病成为可能。

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【学术前沿：AAV-CRISPR基因编辑疗法，让一次性注射治疗艾滋病成为可能】多年以来，科学家们在治疗HIV感染时一直面临一个十分棘手的问题——HIV在人体中变异迅速，极易产生耐药性。令人兴奋的是， 2011年MichelNussenzweig团队在一名HIV感染者体内分离出了一种HIV广泛中和抗体——3BNC117 。
然而，尽管针对HIV的强效、广泛中和抗体（bNAb）可以保护机体免受感染，但众多的艾滋病候选疫苗的临床试验最终无一不以失败告终，这提示我们想要通过传统的免疫方法实现对HIV的免疫是十分困难甚至是不可能的，必须走出新的道路。
对此，如果能通过CRISPR技术直接编辑免疫球蛋白基因来重编程体液免疫，使之产生靶向特定病原体（如HIV病毒）的中和抗体，那将是一种里程碑式的革新。
在这项最新研究中，研究团队设计了两种重组腺相关病毒（AAV）：一种编码CRISPR-Cas9基因编辑系统，包括CMV/SFFV启动子驱动的SaCas9和U6启动子驱动的sgRNA；另一种编码靶向免疫球蛋白基因的HIV-bNAb-3BNC117同源性定向修复模板（HDRT）。

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两种重组腺相关病毒递送CRISPR-Cas9基因编辑系统和HDRT
研究人员使用各种HIV包膜糖蛋白（Env）为基础的免疫原免疫小鼠，以扩大激活细胞的数量， 6天后通过静脉注射将这两种重组AAV地送到小鼠体内。经过几次相同的HIV-Env增强免疫后，小鼠的血清中开始表达广泛中和抗体，并且可以中和3BNC117敏感的HIV毒株。

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免疫小鼠产生3BNC117
紧接着，研究团队通过高通量测序分析了基因编辑效果。正如预期的那样，早期可在小鼠的肝脏和血液中发现AAV基因组的强烈富集，随着时间的推移，在肝脏中AAV拷贝数减少，而在免疫小鼠的淋巴结和骨髓中增加，这表明在这些组织中B细胞克隆扩增正在进行。

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注射AAV后130天，在免疫小鼠的淋巴组织中发现了体内工程B细胞