小鼠心肌纤维化影响肥厚型心肌病方案设计分享——Apelin-13/Sphk1/S1P/Rho( 二 ) _健康小知识

（3）cTnIR145G转化的心肌细胞+NC-siRNA
（4）cTnIR145G转化的心肌细胞+Apelin-13处理浓度100nmol/L ， 48h
（5）cTnIR145G转化的心肌细胞+Apelin-13处理浓度100nmol/L ， 48h+siRNA-S1P2
（6）cTnIR145G转化的心肌细胞+Apelin-13处理浓度100nmol/L ， 48h+NC-siRNA
（7）cTnIR145G转化的心肌细胞+SKI-Ⅱ（SphK1抑制剂）10uM ， 20min；
（8）cTnIR145G转化的心肌细胞+SKI-Ⅱ（SphK1抑制剂）10uM ， 20min+Apelin-13处理浓度100nmol/L ， 48h
（9）cTnIR145G转化的心肌细胞+CompoundC（AMPK抑制剂）10μmol/L ， 20min；
（10）cTnIR145G转化的心肌细胞+10μmol/LCompoundC抑制剂20min+Apelin-13处理浓度100nmol/L ， 48h
（11）cTnIR145G转化的心肌细胞+3-TYP（SIRT3抑制剂）；
（12）cTnIR145G转化的心肌细胞+Apelin-13处理浓度72小时+SIRT3抑制剂；
检测
（1）QPCR检测S1P2、SphK1、PGC-1α、FoxO3a、AMPK、SIRT3
（2）WB检测：CollIα1、β-肌球蛋白重量、S1P2、SphK1、AMPK、p-AMPK、PGC-1α、FoxO3a、p-FoxO3a；
（3）免疫荧光染色：β-肌球蛋白重量、αSMA；
（4）TUNEL法及流式细胞术检测心肌成纤维细胞凋亡；
（5）检测细胞内ROS含量和ATP含量；
五、利用转基因小鼠从整体探讨Apelin-13通过TGF-β/SphK1/S1P信号通路抑制心肌纤维化的机制
（1）野生型小鼠
（2）肥厚型心肌病（HCM）转基因小鼠（cTnIR145G转基因小鼠）
（3）肥厚型心肌病（HCM）转基因小鼠（cTnIR145G转基因小鼠）+安慰剂组干预3月
（4）肥厚型心肌病（HCM）转基因小鼠（cTnIR145G转基因小鼠）+apelin-13干预3月
（5）肥厚型心肌病（HCM）转基因小鼠（cTnIR145G转基因小鼠）+apelin-13干预组+SphK1抑制剂
（6）肥厚型心肌病（HCM）转基因小鼠（cTnIR145G转基因小鼠）+apelin-13干预组+SIRT3抑制剂
3个月后取心脏样本，进行后续检测；
（1）HE和masson染色，拍照，病理分析；
(2）免疫组化检测1P2、β-肌球蛋白重量、α-SMA、CollIα1、SIRT3、AMPK、p-AMPK评价心肌纤维化的程度和变化;
(3）QPCR和WB检测TGFβ、SphK1、S1P2、CollIα1、β-肌球蛋白重量、SIRT3、Fox03a、p-Fox03a、AMPK、p-AMPK；
（4）ATP试剂盒检测心脏组织中ATP；
（5）TUNEL凋亡检测心肌细胞凋亡；
（6）投射电镜观察心肌组织超微结果。
下列为我们项目中的实验结果例图，大家可以参考学习：

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WB

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流式凋亡

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免疫组化

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HE
上述方案为我们通过文献调研后推测的可能分子机制，涉及的所有检测方法的原理以及目的我们非常熟练，通过细胞实验和动物实验严谨的讲述了Apelin-13/Sphk1/S1P/Rho在心肌纤维化中的作用，从而调控肥厚型心肌病。如果想证实这个机制，需要按上述方案进行科学实验，获得实际检测数据后进行验证分析。如果你有其他类似机制想要探究，比如膀胱癌发生机制或者其他疾病，都可以参考上述方案进行探究。此外还可以结合转录组、代谢组、蛋白组以及甲基化组学测序方式进行联合分析，对纤维化心肌病的可能机制进行更完善的解答，为临床疾病的预防和治疗提供更多参考依据。返回搜狐，查看更多
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