癌症|《自然·癌症》：南京鼓楼医院团队发现肝癌发病新机制( 二 ) 团队|新机制|研究人员|基因|发

随后的细胞实验发现，敲除hnRNP K ，能减弱肝癌细胞增殖和迁移侵袭的能力，并且还能消除lnc-CTHCC过表达对肝癌细胞增殖和转移的促进作用；而过表达hnRNP K ，则能挽救lnc-CTHCC敲除导致的肝癌细胞增殖和迁移能力的下降。另外， hnRNP K还能调节肿瘤转移相关标志物的表达。由此可见，lnc-CTHCC通过直接结合hnRNP K参与肝癌的发生和转移。

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▲ 免疫沉淀显示lnc-CTHCC和hnRNP K结合（图d）；hnRNP K在肝癌组织中表达升高（图i）；hnRNP K高表达与肝癌患者的预后降低显著相关（图m）；敲除hnRNP K后，肝癌细胞增殖（图n和图o）和迁移侵袭（图p）的能力减弱；hnRNP K过表达挽救了lnc-CTHCC敲除对肝癌细胞增殖和转移的抑制作用（图q）；hnRNP K敲除抵消了lnc-CTHCC过表达对肝癌细胞增殖和转移的促进作用（图r）
为了进一步确定lnc-CTHCC在hnRNP K后的下游机制，研究人员检测了lnc-CTHCC在肝癌中调控的信号通路，发现与细胞生长相关的Hippo信号通路，在lnc-CTHCC敲除的肝癌组织中明显富集，其中，通路的核心蛋白YAP1水平显著降低。
染色质免疫沉淀发现hnRNP K与YAP1启动子区域结合，荧光素酶报告基因实验证明敲除hnRNP K能降低YAP1的转录活性。这些结果表明，在与hnRNP K直接结合后， lnc-CTHCC募集hnRNP K至YAP1启动子区域，促进YAP1转录。
YAP1作为一种癌基因，在多种癌症中表达上调，能促进癌症细胞的增殖和存活[6] 。那么， lnc-CTHCC是否是通过YAP1来促进肝癌的发生呢？
为了确定YAP1在肝癌中的生物学功能，研究人员验证了YAP1在肝癌中的表达水平：YAP1在肝癌组织中高表达，高YAP1与总生存率降低显著相关。敲除YAP1 ，肝癌细胞增殖和迁移侵袭能力减弱，并且能消除lnc-CTHCC过表达对肝癌细胞增殖和转移的增强效应。在小鼠肝癌模型中， YAP1基因敲除能显著抑制lnc-CTHCC诱导的肿瘤生长。这些结果表明，lnc-CTHCC依赖于YAP1促进肝癌细胞的恶性表型。

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▲ lnc-CTHCC敲除后， YAP1表达降低（图f）；hnRNP K与YAP1启动子区域结合（图k）；高YAP1与肝癌总生存率降低显著相关（图L）；敲除YAP1 ，肝癌细胞增殖减弱（图B），并且能消除lnc-CTHCC过表达对肝癌细胞增殖的促进效应（图D）；在肝癌小鼠中，敲除YAP1抑制lnc-CTHCC诱导的肿瘤生长（图G）。
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▲ m6A修饰的功能（黄框所示为本文涉及的三个相关蛋白）
研究人员发现，作为一种lncRNA ，在肝癌中，lnc-CTHCC的m6A修饰水平显著上升。敲除或过表达METTL3 ，能相应地下调或上调lnc-CTHCC表达，进而抑制或促进肝癌细胞的恶行生物学行为。因此， METTL3通过增加对lnc-CTHCC的m6A修饰，上调lnc-CTHCC的表达，发挥对肝癌细胞的调节功能。

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▲ 本文机制示意图（Normal：正常组织；HCC：肝癌组织）
本研究中，研究人员先是通过生信分析，发掘和鉴定了一个新的CT基因， lnc-CTHCC；尔后，通过一系列的实验，探索和验证了lnc-CTHCC在METTL3–IGF2BP1/IGF2BP3–lnc-CTHCC–hnRNP K–YAP1轴中发挥的关键作用。整个过程丝丝入扣，创新性地提出CT-lncRNA是驱动肝癌发生的新靶标，有望为肝癌的个性化治疗提供新思路。