癌症|《自然·癌症》：发现了能重塑“癌王”肿瘤微环境的联合疗法( 二 ) 亚型|充质|Saur|尼达尼布|癌细胞

【癌症|《自然·癌症》：发现了能重塑“癌王”肿瘤微环境的联合疗法】接下来，Saur团队进行了系统的、高通量的组合化合物筛选，以确定与曲美替尼具有协同作用的药物。
他们用曲美替尼分别联合418种药物，在代表经典腺体亚型和KRAS突变的间充质亚型的人和小鼠的PDAC中进行筛选。经过大量的细胞实验发现，曲美替尼与尼达尼布（T/N）在人和小鼠间充质亚型的PDAC治疗中具有显著的协同作用。尼达尼布是临床批准的RTK抑制剂，是治疗间充质PDAC的最热门药物之一。
为了找到曲美替尼和尼达尼布的直接靶点，研究人员进一步研究了经典腺体亚型及间充质亚型的6种mPDAC ，结果发现曲美替尼能选择性抑制MEK1/2 ，而尼达尼布的作用靶点广泛，主要富集在RTK和细胞表面受体中。
随后，为了确定介导T/N应答相关通路， Saur团队分析了磷酸蛋白质组的变化。在间充质亚型的PDAC中，一系列重要的癌症相关通路的活性降低，如调节PI3K/AKT信号的细胞周期调节因子细胞周期蛋白依赖激酶2（CDK2）、细胞周期蛋白D和细胞周期蛋白E、PP2A和IER3、ERBB2、mTOR和KIT下游信号等，以及RAF依赖和非依赖性ERK1/2激活。这些结果表明间充质亚型的PDAC依赖广泛的RTK驱动的信号输入。
上述发现提示了需要以多种激酶为靶点，才能在KRAS突变的间充质亚型PDAC中实现有效的治疗！
为了进一步破译T/N协同作用的关键基因， Saur团队在三种间充质亚型的小鼠PDAC细胞中使用了全基因组混合筛选，以及基于CRISPR基因编辑技术筛选。发现在前期实验中确定的53个尼达尼布靶点中，15个与曲美替尼有功能相关性。
此外，他们还通过CRISPR基因编辑技术，发现多个靶点的组合缺失导致间充质亚型的PDAC对曲美替尼敏感，其中Prkaa1、FGFR1和Map2k5的联合缺失作用最为显著。这再一次证实需要广泛的靶点来有效和全面地治疗KRAS突变的间充质PDAC 。
令人兴奋的体外实验结果，驱使研究人员构建经典腺体亚型和间充质亚型的小鼠PDAC原位移植模型，以探索体内联合治疗疗效。实验结果发现 T/N联合疗法有效抑制间充质亚型的PDAC肿瘤增长，肿瘤体积显著减少约40% ，且小鼠存活率延长一倍（图2b-d）。

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图 2 a Kaplan–Meier曲线比较经典和间充质原位PDAC模型的存活率。 b MRI评估1周治疗后经典腺体亚型和间充质型PDAC肿瘤体积变化。 c 对照组和T/N治疗组小鼠的代表性MRI 。 d 经典和间充质原位模型的Kaplan–Meier生存曲线。
令人欣喜的是，这是第一种对KRAS突变体基因扩增驱动的间充质PDAC有效的联合疗法！至于背后的机制， Saur团队发现T/N治疗显著增加了T细胞向间充质PDAC的浸润，将“冷肿瘤”PDAC转化为具有免疫响应的“热肿瘤” 。
同时，他们还发现一个有趣的现象。间充质PDAC的肿瘤切片显示CD8+T细胞浸润增加在血管周围最为明显，他们认为这可能是因为T/N联合治疗重塑了血管导致的。相比之下，经典腺体亚型的PDAC肿瘤却表现出免疫排斥的特征，仅在肿瘤边缘有中度富集的T细胞（图3a-d）。表明 T/N联合治疗仅能重编程间充质亚型的PDAC ，而对经典亚型的作用并不明显。

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图 3 a T/N治疗小鼠肿瘤中适应性免疫细胞群的比例。 b T/N联合治疗1周的肿瘤CD4+和CD8+T细胞的流式统计分析。 c T/N治疗1周的原位移植间充质模型的肿瘤切片的CD3+和CD8+T细胞的IHC染色的代表性图像。 d CD3+细胞染色组织切片的代表性图像（绿色）。