引物长度 _生活经验

为什么PCR引物可以决定被合成片段的大小因为GC之间有三个氢键，而AT之间只有两个氢键，因此GC含量越高，要打开氢键的能量就要求越大，即退火温度越高。PCR退火有的是根据GC含量估算Tm

更详细说明次料：
PCR引物应该保持合理的GC含量。含有50％的G+C的20个碱基的寡核苷酸链的Tm值大概在56～62℃范围内，这可为有效退火提供足够热度。一对引物的GC含量和Tm值应该协调。协调性差的引物对的效率和特异性都较差，因为降低了Tm值导致特异性的丧失。这种情况下引物Tm值越高，其错误引发的机率也越大。若采用太高的退火温度，Tm值低的引物对可能完全不发挥作用。在从一批在特定序列范围内已合成好的寡核苷酸中选择一对新的引物时，这种GC含量和Tm值的协调非常关键。一般来说，一对引物的Tm值相差尽量不超过2～3摄氏度，同时引物和产物的Tm值也不要相差太大，20摄氏度范围内较好。

长pcr引物设计以及扩增条件引物设计遵循常规就可以，注意别太短，还有尽量减少错配；扩增程序可以看说明，5~8K没问题，不难扩增，注意算好延伸时间就好，我之前做过一段20K左右的扩增，如果您实验中有问题可以再联系我私聊。

高中生物pcr技术扩增的是两引物之间的核苷酸序列是什么意思PCR技术中扩增的是两引物之间的核苷酸序列，意思是采用该技术，可以大量扩增引物之间的序列，一般情况下，我们需要大量的某一基因的片段时，我们在基因的两端分别设计引物（一段一条），然后在体外，采用PCR的方法，用引物进行体外DNA复制，从而大量合成引物之间的基因。

PCR即聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。

其原理为：
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，加入设计引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。

但是，DNA聚合酶在高温时会失活，因此，每次循环都得加入新的DNA聚合酶，不仅操作烦琐，而且价格昂贵，制约了PCR技术的应用和发展。

耐热DNA聚合酶--Taq酶的发现对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。

PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在72℃、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链，重复循环变性--退火--延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

荧光定量PCR引物设计为什么要在100-200bp之间1、荧光PCR引物不是100-200bp，而是20-30bp之间，2、引物长度大小主要是由TM值决定的。

pcr扩增对引物有什么要求？为什么1，这是由DNA聚合酶决定的。DNA聚合酶只能在具有前端片段的情况之下，才能够顺着这个片段合成下去。所以一定要有引物作为DNA聚合酶的引导片断。2 。引物结合在DNA的什么位置决定了要扩增的部分。因此引物根据双链互补的原则设计出来，从而确定DNA扩增的区域。

pcr引物产物长度控制在多长合适你是想问引物长度还是PCR产物长度？
引物一般20~25nt
产物在500~1000nt之间比较容易操作

怎样通过已知基因序列和引物序列测算PCR产物大小你说的这个PCR后片段的大小是指你插入到载体中的目的基因长度，还是整个载体的长度啊？你的问题表述的不明白。

从NCBI上查找到的一个目的基因做PCR，设计引物时PCR产物长度是这个基因的全部序列吗？是的，因为你的PCR产物就是你要得到的目的基因不是吗？！

怎样通过已知基因序列和引物序列测算PCR产物大小ncbi 里面选blast 然后输入你的正反引物就可以计算出对应pcr产物大小

怎样通过已知基因序列和引物序列测算PCR产物大小很简单啊，首先在基因序列中查找5f段引物，做好标记，然后再反向互补查找3r段引物位置，做好标记，统计两个标记间的字数（包括引物）就可以了啊

普通的PCR，产物的长度一般要求多大合适没有严格限制,主要限制性因素是酶,KOD可能到5000bp仍然不会有错P,但是其他的比如Taq在很少的时候就产生错P,错误的PCR产物（错P）才是我们要关注的要点

知道引物怎么确定pcr产物的长度知道了引物，并且有这条序列，就是gene map,在gene map里面找到这对primer的位置，primer之间的bp数（就是多少个AGCT）就是产物的size （bp数）
半定量RT-PCR设计引物时产物长度为多少合适【引物长度】18-25bp
产物啊，半定量无所谓吧。
这年头为什么还做半定量呢，直接做q-pcr也不贵啊，产物80到500bp，偶喜欢100-300bp的样子。

为什么在进行pcr扩增引物设计中通常要求引物长度为20nt以上引物浓度：引物浓度尽量按照酶的说明书给的浓度，自己再那个浓度再设置一个范围去摸索一下。也可以按照师兄师姐给的经验浓度自己去摸索一下，因为有时候说明书给的参数会是错的！这个真的很坑，所以第一次做的实验一定要找师兄师姐问清楚具体的参数和细节，避免走弯路、浪费试剂。不同的酶对引物浓度也可能会有点差别。引物浓度太低或太高了都会导致P不出来。有极少数情况，可能引物公司合成回来的引物F/R不对，比如R引物少了一半，所以引物溶解之后测一下浓度，自己根据OD和引物长度对应的摩尔量换算一下看对不对，但是这样的情况很少，我三年只遇到过一次，这样公司真的很坑爹！（因为我一模一样的重复了两次EMSA，发现结果跟之前的不对，最后排除问题发现是引物的一条少了一半，当时浪费了我一整天的时间，真的很心酸，这种奇葩的问题都能被我遇到。）如果是的话，和公司反应重新合成就行了。还有就是引物是否降解。引物设计是否合理：这个你可以设计好之后，让师兄师姐帮忙检查一下，避免设计的引物有问题，导致后面实验不断重复还找不到原因。3）DNA聚合酶：我们实验室用的是KOD FX，这个酶很好用，扩增能力很强，保真性也挺高。酶要保存在-20，用的时候也要放在冰上，加完就尽快放回-20，这样对酶的保护是比较好的，避免因为保存不当，一管酶用到后面活性下降了，导致扩增不出来。有时候一种酶扩增不出来就换一种试试，实验只能不断尝试了，失败多了就有自己的经验了。用之前一定要认真看说明书，有时候认真看了说明书，你还能学到一些知识。

为什么荧光定量PCR产物长度最好不要超过300bp不能荧光定量PCR产旦筏测禾爻鼓诧态超卡物长度最好不要超过300bp 产物越长一次循环激发的荧光就越多达到荧光阈值需要的循环数就越少会使得CT值出现过晚,一般采用80-150bp的产物长度.

PCR扩增的正反向引物的长度必须一致吗？可以用，没有任何特别问题。实际上，如果你用过一些引物设计的软件，有时候你会发现，软件设计出来的引物长度有可能不同（当然，大部分时候是相同的），这有可能是考虑的引物Tm，引物二聚体，引物非特异性结合等问题。除了一般引物设计所遇到的问题，长度不同不会引起额外的特别问题。

pcr引物扩增出来的长度和实际产物长度不一样，但相差很少，怀疑是引物本身可能有发夹结构，有这个可能么？楼主这个相差很少是什么概念？ 100bp？10bp? 如何分辨的？

引物的发卡结构不会太多的影响PCR产物的长度，发卡结构可能影响扩增效率。一般没影响。。。除非你的引物非常长，楼主的引物有多长？

实在不行就去测个序。

希望楼主多提供些信息。。

请问楼主是用什么方法分辨出20bp的差异的？琼脂糖吗？
还是建议直接去测序，

或者如果你有标准品，把标准品和你PCR出来的产物混合在一起跑胶（浓度低一点总共100-200ng就好），胶的浓度高一点，1.5%或者2.0%，120伏，多跑一会看会不会有两条带。

楼主你可以追问。。这样方便点。。

这个不一定准的，这么小的误差是不能用marker说明的...要么你看我上面的方法，有标准品的话可以试试，在我们实验室，一般认为这个是误差范围内可接受的。因为MARKER也不是非常准，也受到胶，缓冲液的环境的影响。

还有，你用的是多少的MARKER？50bp ladder? 还是100bp ladder？

有酶切位点吗两端？直接连进质粒测序吧。。看不到图也没法说。。不过首先你还是再跑一遍吧我觉得。。

引物的设计原则

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引物设计原则1、长度：15—30bp，其有效长度[Ln=2(G十C)十(A十T)]一般不大于38，否则PCR的最适延伸温度会超过Taq酶的最佳作用温度(74度)，从而降低产物的特异性。2、G十C含量：应在40%一60%之间，PCR扩增中的复性温度一般是较低Tm值引物的Tm值减去5—10度。引物长度小于20时，其Tm恒等于4×(G十C)十2×(A十T) 。3、碱基分布的随机性：应避免连续出现4个以上的单一碱基。尤其是不应在其3’端出现超过3个的连续G或C，否则会使引物在G十C富集序列区错误引发。4、引物自身：不能含有自身互补序列，否则会形成发夹样二级结构。5、引物之间：两个引物之间不应有多于4个的互补或同源碱基，不然会形成引物二聚体，尤应避免3’端的互补重叠。6、上下游引物的互补性：一个引物的3‘末端序列不允许结合到另一个引物的任何位点上。7、3’末端：如果可能的话，每个引物的3‘末端碱基应为G或C 。8、引物应当超出限制性内切酶识别位点至少3个核苷酸。扩展资料引物合成1、是将预先连接在固相载体上的活性基团被保护的核苷酸与三氯乙酸反应，脱去其5′-羟基的保护基团DMT，获得游离的5′-羟基。2、合成DNA的原料，亚磷酰胺保护核苷酸单体，与活化剂四氮唑混合，得到核苷亚磷酸活化中间体，它的3′端被活化，5′-羟基仍然被DMT保护，与溶液中游离的5′-羟基发生缩合反应。3、带帽(capping)反应，缩合反应中可能有极少数5′-羟基没有参加反应(少于2%)，用乙酸酐和1-甲基咪唑终止其后继续发生反应，这种短片段可以在后续环节根据实验需要来选择纯化方式分离掉。4、在氧化剂碘的作用下，亚磷酰形式转变为更稳定的磷酸三酯。参考资料来源：百度百科—引物设计
设计得引物有多对，怎么确定哪一对最好1 基因有多种变体，该怎么设计？你如果仅仅检测这个基因的表达量，你可以将引物设计在这多种变体的保守区域内，就是所有变体都包含的区域。如果你明确要检测哪一个变体，就设计在这个变体独有的区域内。2 引物blast后的产物有多种你应该是在NCBI上进行的primer blast吧？你只要看到你的引物扩增出来的都是你要的目的基因就好了。在NCBI上有很多标记，一般认为NM的是NCBI上认可的reference的序列，NX是用户上传还未认证的序列，你忽略也是可以的。predicted是指用户预测的序列，建议你还是用NCBI认证的序列。

PCR产物长度比引物设计的长很多，怎么回事PCR反应的原理你还不清楚吧。引物是与扩增片段的上下游结合的，一般才20bp左右，扩增的片段可以几百bp或几千bp，是引物结合后还会在扩增过程中以DNA为模板继续延长的

pcr引物设计的基本原则有哪些？引物长度一般为15-30bp，常用的为18-27bp，但不能大于38bp；引物GC含量一般为40%-60%，以45-55%为宜，上下游引物GC含量和Tm值要保持接近；引物所对应的模板序列的Tm值最好在72℃左右，至少要在55-80℃之间，Tm值曲线以选取72度附近为佳，5'到 3’的下降形状也有利于引物与模板的结合；ΔG值（自由能）反应了引物与模板结合的强弱程度，3'端的ΔG值相对要低，且绝对值不要超过9，否则不利于正确引发反应，3'末端双链的ΔG值在0--2kcal/mol时，PCR产量几乎达到百分之百，但在-6时只达到40%，-8时少于20%，-10时接近于0 。PCR引物的设计原则引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。产物不能形成二级结构。引物长度一般在15~30 碱基之间。G+C含量在40%~60%之间。碱基要随机分布。引物自身不能有连续4个碱基的互补。引物之间不能有连续4个碱基的互补。引物5′端可以修饰。引物3′端不可修饰。引物3′端要避开密码子的第3位。
地基与基础的设计基本原则有哪些

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地基基础设计应符合下列规定：1、所有建筑物的地基计算均应满足承载力计算的有关规定。2、设计等级为甲级、乙级的建筑物，均应按地基变形设计。3、设计等级为丙级的建筑物有下列情况之一时，应作变形验算。①地基承载力特征值小于130kPa，且体型复杂的建筑。②在基础上及其附近有地面堆载或相邻基础荷载差异较大，可能引起地基产生过大的不均匀沉降时。③软弱地基上的建筑物存在偏心荷载时。④相邻建筑距离近，可能发生倾斜时。⑤地基内有厚度较大或厚薄不均的填土，其自重固结未完成时。4、对经常受水平荷载作用的高层建筑、高耸结构和挡土墙等，以及建造在斜坡上或边坡附近的建（构）筑物，尚应验算其稳定性。5、基坑工程应进行稳定性验算。6、建筑地下室或地下构筑物存在上浮问题时，尚应进行抗浮验算。扩展资料：地基基础的检测可分为地基检测和基础检测。地基检测包括地基土层的分布及其均匀性，软弱下卧层、特殊土及沟、塘、古河道、墓穴、孤石、防空洞等的检测。地基土的物理力学性能与地下水的水位及其腐蚀性的检测；砂土及粉土的液化性质、软土的震陷性质以及场地稳定性的检测等。地基的检测方法可以分为三类：①钻探、坑探、槽探或地球物理勘探等方法。②原状土室内物理力学性能试验。③原位试验。基础检测包括基础类型、材料、尺寸及埋置深度、基础开裂、腐蚀或损坏程度、基础材料的强度等级、基础的倾斜、弯曲、扭曲等情况。桩基础的入土深度、持力层情况和桩身质量等。基础的检测一般采用局部开挖的方法。参考资料来源：百度百科-地基基础参考资料来源：百度百科-建筑地基基础设计规范
PCR引物设计应遵循哪些原则PCR引物设计的11条黄金法则 1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。2.引物长度一般在15~30碱基之间。引物长度（primerlength）常用的是18-27bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于TaqDNA聚合酶进行反应。3.引物GC含量在40%~60%之间，Tm值最好接近72℃ 。GC含量（composition）过高或过低都不利于引发反应。上下游引物的GC含量不能相差太大。另外，上下游引物的Tm值（meltingtemperature）是寡核苷酸的解链温度，即在一定盐浓度条件下，50%寡核苷酸双链解链的温度。有效启动温度，一般高于Tm值5~10℃ 。若按公式Tm=4（G+C）+2（A+T）估计引物的Tm值，则有效引物的Tm为55~80℃，其Tm值最好接近72℃以使复性条件最佳。4.引物3′端要避开密码子的第3位。如扩增编码区域，引物3′端不要终止于密码子的第3位，因密码子的第3位易发生简并，会影响扩增的特异性与效率。5.引物3′端不能选择A，最好选择T 。引物3′端错配时，不同碱基引发效率存在着很大的差异，当末位的碱基为A时，即使在错配的情况下，也能有引发链的合成，而当末位链为T时，错配的引发效率大大降低，G、C错配的引发效率介于A、T之间，所以3′端最好选择T 。6.碱基要随机分布。引物序列在模板内应当没有相似性较高，尤其是3’端相似性较高的列，否则容易导致错误引发（Falsepriming）。降低引物与模板相似性的一种方法是，引物中四种碱基的分布最好是随机的，不要有聚嘌呤或聚嘧啶的存在。尤其3′端不应超过3个连续的G或C，因这样会使引物在GC富集序列区错误引发。7.引物自身及引物之间不应存在互补序列。引物自身不应存在互补序列，否则引物自身会折叠成发夹结构（Hairpin）使引物本身复性。这种二级结构会因空间位阻而影响引物与模板的复性结合。引物自身不能有连续4个碱基的互补。两引物之间也不应具有互补性，尤其应避免3′端的互补重叠以防止引物二聚体（Dimer与Crossdimer）的形成。引物之间不能有连续4个碱基的互补。引物二聚体及发夹结构如果不可避免的话，应尽量使其△G值不要过高（应小于4.5kcal/mol）。否则易导致产生引物二聚体带，并且降低引物有效浓度而使PCR反应不能正常进行。8.引物5′端和中间△G值应该相对较高，而3′端△G值较低。△G值是指DNA双链形成所需的自由能，它反映了双链结构内部碱基对的相对稳定性，△G值越大，则双链越稳定。应当选用5′端和中间△G值相对较高，而3′端△G值较低（绝对值不超过9）的引物。引物3′端的△G值过高，容易在错配位点形成双链结构并引发DNA聚合反应。（不同位置的△G值可以用Oligo6软件进行分析）9.引物的5′端可以修饰，而3′端不可修饰。引物的5′端决定着PCR产物的长度，它对扩增特异性影响不大。因此，可以被修饰而不影响扩增的特异性。引物5′端修饰包括：加酶切位点；标记生物素、荧光、地高辛、Eu3+等；引入蛋白质结合DNA序列；引入点突变、插入突变、缺失突变序列；引入启动子序列等。引物的延伸是从3′端开始的，不能进行任何修饰。3′端也不能有形成任何二级结构可能。10.扩增产物的单链不能形成二级结构。某些引物无效的主要原因是扩增产物单链二级结构的影响，选择扩增片段时最好避开二级结构区域。用有关软件（比如RNAstructure）可以预测估计mRNA的稳定二级结构，有助于选择模板。实验表明，待扩区域自由能（△G°）小于58.6lkJ/mol时，扩增往往不能成功。若不能避开这一区域时，用7-deaza-2′-脱氧GTP取代dGTP对扩增的成功是有帮助的。11.引物应具有特异性。引物设计完成以后，应对其进行BLAST检测。如果与其它基因不具有互补性，就可以进行下一步的实验了。
通用引物和特异性引物的区别

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通用引物，含义为克隆位点两旁的序列匹配，目的是引扩出DNA片段，主要用来测序。而序列特异性引物指一种测定基因突变的方法。通用引物是一般和载体多克隆位点两旁的序列匹配，或者是与载体里面的一些启动、终止元件匹配。这样不管载体插入什么DNA片段，都可以用通用引物扩出来。通用引物可以用来测序，但是只是“通用”，也不是万能的。序列特异性引物利用针对点突变的2个等位特异性寡核苷酸(ASO)引物(A、B标记其中之一)与另一共同引物（C）组成引物系统；在引物延伸时，A与B同时竞争靶序列上同一复性位点，扩增反应后，经凝胶电泳及放射自显影，胶片上的显带是标记同位素的引物所扩增的产物。扩展资料：设计要求做Real Time时,用于SYBR Green I法时的一对引物与一般PCR的引物,在引物设计上所要求的参数是不同的。引物设计的要求：1、避免重复碱基，尤其是G 。2、Tm=58-60度。3、GC=30-80% 。4、3'端最后5个碱基内不能有多于2个的G或C 。5、正向引物与探针离得越近越好，但不能重叠。6、PCR扩增产物长度：引物的产物大小不要太大，一般在80-250bp之间都可；80～150 bp最为合适（可以延长至300 bp）。7、引物的退火温度要高，一般要在60度以上；要特别注意避免引物二聚体和非特异性扩增的存在。而且引物设计时应该考虑到引物要有不受基因组DNA污染影响的能力，即引物应该跨外显子，最好是引物能跨外显子的接头区，这样可以更有效的不受基因组DNA污染的影响。做染料法最关键的就是寻找到合适的引物和做污染的预防工作。对于引物，要有从一大堆引物中挑出一两个能用的引物的思想准备---寻找合适的引物非常不容易。参考资料来源：百度百科-引物参考资料来源：百度百科-通用引物参考资料来源：百度百科-序列特异性引物
如何验证引物的特异性【求助】如何验证引物特异性？？我做的PCR结果除了目的条带还稳定地出现一条同样大小的非目的条带，我想应该是引物的问题，但是怎么验证引物扩增的就只有靶基因的目的条带还是有其他匹配的可扩增的非目的条带啊？急切盼望各位高手指点！！OLIGE 。6软件就可以验证引物的特异性。。如果存在同源性你可以BLAST一下。我不知道你的非目的条带是指什么？如果在100BP一下的应该是引物二聚体。。做普通PCR影响不大。。荧光定量的就不能有任何非目的条带。。我建议你提高一下退火温度。。每次提高3-4度随着温度的升高目的基因的特异性就越高杂带就越少。。但是目的基因扩增出来的量就会变少。。如果提高温度不行那就要换换引物。。不要轻易更换引物。要反复的做预试验。。非常感谢啊！我说的非特异条带不是引物二聚体，退火温度也提高试过了，还是有。但是olige.6和blast我还不怎么会用啊，能否有具体的操作方法啊？谢谢了啊！在专门的引物设计软件中，“Oligo”是最著名的。它的使用并不十分复杂，但初学者容易被其复杂的图表吓倒。Oligo 5.0的初始界面是两个图：Tm图和ΔG图；Oligo 6.0的界面更复杂，出现三个图，加了个Frq图。“Oligo”的功能比“Premier”还要单一，就是引物设计。但它的引物分析功能如此强大以至于能风靡全世界。oligo的下载和安装我就不多说了，打开oligo相信也无需多讲。单击file菜单再点open或点击“打开”快捷图标或者用快捷键“CTrl＋O”可打开下面的窗口在打开的OPEN窗口内选择FreqSeq再点“打开选择drosfr或者其它一个文件点击“打开”出现以下窗口，点击“window”再点击“Tile”出现以下窗口，图中显示的三个指标分别为Tm、ΔG和Frq，其中Frq是6.0版本的新功能，为邻近6至7个碱基组成的亚单位在一个指定数据库文件中的出现频率。该频率高则可增加错误引发的可能性。因为分析要涉及多个指标，起动窗口的cascade排列方式不太方便，可从windows菜单改为tile方式。如果觉得太拥挤，可去掉一个指标，如Frq，这样界面的结构同于Oligo 5.0，只是显示更清楚了。∆G值反映了序列与模板的结合强度，最好引物的∆G值在5’端和中间值比较高，而在3’端相对低（如图：）Tm值曲线以选取72℃附近为佳，5’到3’的下降形状也有利于引物引发聚合反应。Frq曲线为“Oligo 6”新引进的一个指标，揭示了序列片段存在的重复机率大小。选取引物时，宜选用3’端Frq值相对较低的片段。再点击Search再点“Fo'r Primers and probes”或使用快捷键F3
基因工程5'ntr的长度和是否可以设计特异性引物的区域是什么意思？基因工程5'ntr的长度和是否可以设计特异性引物的区域俺为您做详细解答。。

为什么pcr退火温度高，结果特异性强，退火温度低非特异多？退火温度越高，断开氢键的热能越大，引物与模板越不易结合，反之，退火温度越低，越容易形成氢键，进行退火。所以当温度高时，只有碱基匹配程度高的，也就是模板与引物形成配对数越多的引物，才能结合到模板上，这样扩增出来的条带最少，甚至只有一条，也就是引物和目的序列的完美匹配，因此特异性越高。反之，若退火温度低，引物和模板匹配低时，也能稳定存在，那么模板上可能存在很多区域能和引物上的少量碱基匹配，进行引发，因此dna条带会很多，非特异带增加。特异带是指你的目的带。非特异带是pcr中扩增出的非目的带。退火是指温度下降，单链DNA与引物结合的过程。温度过低，可造成引物与模板之间只需有一小段可以互补配对就能配对，造成非特异性产物增加。而温度高时，需要引物与模版之间有较长的互补配对序列才能相互配对，特异性增强。

引物与模板非特异性配对位点的碱基配对率小于70%引物与模板配对时，预期应当只与目的基因上你所设计的位点配对，这样的成为特异性配对

但是引物也有可能与模板的其他位置配对结合，这样的结合就成为非特异性配对，引物所结合的位点就称非特异性结合位点
其原因可能是引物本身序列的特异性不强，与模板上其他的序列有若干可互补的碱基序列
或者是设计的退火温度不好，导致引物的特异性结合能力差

希望对你有帮助，望采纳

PCR 技术的引物是一小段单链DNA 还是一小段双链片段?引物一般都是单链DNA，用于和模板的互补。

判断题，求大神给个答案和解释，谢谢：所谓引物就是同DNA互补的一小段RNA分子( )
pcr扩增的引物是一段dna 吗还是rna 细胞中的dna复制需要的引物可以是双链DNA，比如基因组DNA或人工合成的双链DNA，也可以是经由RNA反转录而来的cDNA 。但不可以是单链DNA或者RNA 。

关于PCR的一道题PCR全称Polymerase Chain Reaction，就是聚合酶链式反应，是一种体外扩增DNA的技术。A对。Taq酶是一种耐热的聚合酶，PCR里从加热变性、降温退火到扩增，温度约需要50~90内变化，而Taq酶能够在这样的环境中仍能发挥催化作用，所以比较稳定。C对。PCR的过程就是DNA的复制过程，加热，双链便单链，然后复制，延伸，为一个循环，然后持续下去……D对
PCR的引物是DNA细小片段，而不是RNA，So，B错误

希望我的回答能让你满意，谢谢
（sorry 完全由自己所想手工敲打，只字未黏贴复制，啰嗦了请54……）

PCR中的引物是什么是DNA还是RNAPCR引物又称为寡核苷酸引物,也就是RNA,是由人工合成的,分为两种,引物1和引物2.由于DNA聚合酶只能从核苷酸链的5'端到3'端进行复制,也就是只能识别3'的尾端,而且只能把核苷酸连到已经和DNA模板互补产生的多核苷酸链上,所以引物1和2分别于双链DNA的两条链的尾部（就是末尾是3'端的那一边）结合,为那些脱氧核苷酸提供3'的末端,就相当于开了个头.然后在DNA聚合酶的作用下合成两条新链.而那段引物就成了新链的一部分.