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1、设计一对引物 , 针对基因两端(覆盖酶切位点) , 在上游引物中酶切位点后的一段序列中添加一个碱基 , 扩增以后,酶切产物和空载体,再连接一遍,转化,小提拿去测序 。
2、最好上游换另一个内切酶位点,这样方便双酶切检测 , 区别于原来的质粒 。
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